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自動白細胞分類計數能減輕臨床實驗室的勞動強度。根據儀器預設標準，在某種程度上可以替代需要專門技能和培訓的檢驗人員，從而提高了結果的準確性。而且，儀器計數的細胞比傳統顯微鏡方法多許多倍，從而也提高了精密度。
采用本標準所述的白細胞分類計數參考方法，對自動白細胞分類計數進行性能評價。
C.1 性能評價內容
本標準所述參考方法適用于某種類型白細胞數量超過5%時的評價。如果細胞數量太低（如嗜堿性粒細胞），預期的變異系數就比較大。但是，在選擇特殊病例后，也可進行精密度試驗。評價方案包括下列幾個部分：
C.1.1 比較試驗，即與參考方法比較。
C.1.2 精密度試驗，包括方法的短期和長期不精密度。
C.1.3 建立參考范圍。由于同一樣本使用儀器法和參考方法得出的參考范圍可以相同，也可以不同，所以必須建立各自的參考范圍。
C.1.4 臨床性能。采用已建立的參考范圍評價儀器對異常樣本檢出的能力。
如果評價方案設計合理，只要采集200份樣本就能完成全部研究。其中，100份樣本取自健康人群，100份樣本必須符合表1的要求。實際工作中，可通過增加樣本數以涵蓋各種臨床情況。
C.2 樣本制備
C.2.1 制片
C.2.1.1 對于參考計數，按照參考方法，準備樣本。
C.2.1.2 對于儀器計數，按照廠商推薦的方法，準備樣本。
C.2.1.3 根據實驗室工作量隨機選擇樣本，包括健康個體和異常樣本。樣本類型應滿足臨床性能研究要求，見表C.1。
C.2.2 標簽
每個樣本應有*編碼，檢驗人員不得知道樣本來源。但應做好記錄，以便能從樣本編碼中了解患者的病史。
表 C.1 臨床性能研究的樣本類型
臨床表現 白細胞計數特點 白細胞值（×109/L） 細胞百分率（％）
急性炎癥 粒細胞增多和/或 ≥9.0 >80
細菌感染 左移*（桿狀核） ≥0.9 >6
慢性炎癥 單核細胞增多 ≥0.8 >10
寄生蟲感染，過敏反應 嗜酸性粒細胞增多 ≥0.5 >7
病毒感染 淋巴細胞增多和/或 ≥3.5 >50
傳染性單核細胞增多癥，
巨細胞病毒感染， 異型淋巴細胞* ≥0.7
傳染性肝炎。
再障，化療 粒細胞減少 ≤1.5 <10
HIV感染 淋巴細胞減少 ≤1.0 <7
急性白血病 幼稚細胞* ≥0.1 >2
嚴重貧血，骨髓病性貧血 有核紅細胞* ≥0.02 >2
*表示在臨床性能研究中，每種病例至少應包括5例
C.3 試驗操作
C.3.1 參考方法必須由實驗室內具備資格的檢驗人員操作。
C.3.2 儀器必須事先校準，每天進行質控測試，并保留校準和質控記錄。
C.3.3 每位患者取2份血液樣本分別用于參考方法和儀器法的測試。若評估圖像分析原理的儀器，應按照廠商說明書要求制備血涂片和染色。若評價流式細胞術原理的儀器，按照廠商說明書要求運行儀器。
C.3.4 研究樣本應統一標記。如參考方法，血涂片標記為A、B和備用；圖像分析方法，血涂片標記為C,D和備用；流式細胞術方法，按照廠商說明書的要求。
C.3.5 保存樣本來源和全血細胞計數的結果記錄。
C.3.6 每天準備每種方法所需要的樣本。
C.3.7 用參考方法進行分類計數時，每份患者樣本分析400個細胞，由兩位具備資格的檢驗人員，按照參考方法步驟，對每張血涂片分析200個細胞。其中，一位檢驗人員使用血涂片A，另一位檢驗人員使用血涂片B。記錄結果，數據必須表明每張血涂片編號和檢驗人員。
C.3.8 儀器法至少對200份樣本進行雙份測定。每天樣本處理量不要超過研究總量的25％。測定細胞總數至少是400個，但不同儀器間實際計數量不同，流式細胞術原理的儀器通常檢測幾千個細胞。記錄測定的實際細胞數量。
C.3.9 樣本應覆蓋正常和異常全部計數范圍。為了便于統計分析，在儀器沒有將桿狀核作為獨立參數報告時，桿狀核計入中性粒細胞總數中。
C.4 數據采集
C.4.1 采集不準確度數據
C.4.1.1 用參考方法計數時，使用玻片盒（或架）放置血涂片，采取隨機化模式排列，便于隨機分析。另一個盒子用于放置已完成檢驗的血涂片。由具備資格的檢驗人員使用參考方法得出參考值。每份樣本的每張血涂片（A或B）必須由一位檢驗人員檢驗，同一檢驗人員不得檢驗同一份樣本的第2張血涂片。
C.4.1.2 每份樣本的分類計數結果登記在數據匯總表上（表C.2）
C.4.1.3 保留儀器原始打印條和登記數據，并與參考方法記錄一一對應。
C.4.1.4 記錄所有樣本白細胞總數，計算儀器法和參考方法的均值。
C.4.2 采集不精密度數據
C.4.2.1 采集短期不精密度數據
C.4.2.1.1 短期不精密度是使用
C.2所述樣本，在同一批次中每份樣本測定兩次。
C.4.2.1.2 計算儀器法或參考方法的短期不精密度。匯總數據見表C.3。
C.4.2.2 采集長期不精密度數據
C.4.2.2.1 長期不精密度是通過測定一段時間內，每天使用質控物在儀器上反復分析某種類型細胞，得出標準差和變異系數。質控物通常由廠商提供。
C.4.2.2.2 長期不精密度估計也可通過收集一段時間內配對樣本的結果獲得。實驗室每周對4份樣本進行雙份分析，然后，縱向比較周與周之間的結果，也能得出不精密度數據。匯總數據見表C.3。
C.5 臨床性能研究
C.5.1 參考范圍的建立
臨床驗證一種方法時需要依賴參考范圍。若儀器法和參考方法結果不*相同時，更需要建立每種方法的參考范圍。臨床性能判斷與參考范圍有關，而與儀器法和參考方法之間的偏倚無關。
C.5.1.1 健康個體
研究中需要100名健康個體。本標準中，健康個體的定義為：
C.5.1.1.1 無已知影響白細胞分類計數的臨床疾病和臨床表現；
C.5.1.1.2 zui近無上呼吸道感染；
C.5.1.1.3 全血細胞計數中其他成分如血紅蛋白，紅細胞壓積，紅細胞計數和白細胞計數應在下列參考范圍內（見表C.4）。
C.5.1.1.4 實驗室工作人員、門診定期隨訪患者和經選擇程序確認的患者，符合上述標準的，可視為健康個體。也可采用獻血前的獻血員樣本。
C.5.2 臨床性能的試驗
C.5.2.1 試驗方法
從臨床實驗室工作中選擇所有樣本，至少連續兩周，并考慮來自各種專科門診和住院患者的樣本。而且，對于儀器法來說，必須考慮實驗室會遇到的zui嚴重疾病，應選擇特殊的異常病例（見表C.1）。樣本數量越大，結果的可靠性越大。
C.5.2.2 儀器報警系統的性能
目的是顯示報警系統識別異常樣本的能力。采用相同樣本，比較儀器法和參考方法之間所有樣本的分類結果，若結果一致，表明報警系統有效。
C.5.3 根據上述試驗結果，計算樣本的一致率、假陽性率和假陰性率。當儀器法和參考方法結果不一致時，由仲裁者判斷結果。
C.6 數據統計學分析
C.6.1 方法學比較（不準確度）
C.6.1.1 參考方法和儀器法
儀器法的不準確度是通過兩種方法比較來確定。目的是判斷計數結果的差異是否可以用儀器法和參考方法的不精密度來解釋，否則表明方法學之間存在真正差異。
C.6.1.2 2統計學分析
C.6.1.2.1 統計學假設
C.6.1.2.1.1 參考方法代表真值，不一致性表示儀器法的不準確度。
C.6.1.2.1.2 測試值（y）在已知參考值（x）下呈Gaussian分布。
C.6.1.2.1.3 每個樣本的y值均值與x值呈線性關系。
C.6.1.2.1.4 通過觀察x-y散點圖上，每個樣本（i）的參考方法均值（xi）與儀器法均值（yi），作出滿意程度的判斷。通過計算儀器法和參考方法的不度，在散點圖上添加代表理論上95％可信區間的線條。若儀器法的數據點落在可信區間外側，必須檢查準確度。
C.6.1.2.2 結果判斷
C.6.1.2.3 影響因素
在分析中，考慮下列影響數據的因素：
C.6.1.2.3.1 樣本間差異：生物學變異為可接受的樣本間差異。
C.6.1.2.3.2 方法間固有偏倚：通過測量兩種方法之間每種類型細胞的均值差異，能得到方法間固有偏倚。
C.6.1.2.3.3 非隨機干擾：已知（非隨機）干擾因素必須從研究數據中剔除。例如，剔除中性粒細胞Pelger-Huët異常的樣本，因為這類樣本使中性分葉核粒細胞減少，可使儀器法與參考方法之間結果不一致。但是，這類樣本在臨床性能研究中不能剔除。
C.6.2 不精密度
C.6.2.1 短期不精密度
短期不精密度是每種類型細胞作重復測定的差異。短期不精密度計算公式：
C.6.2.2 長期不精密度
長期不精密度是用質控物作連續重復測定。長期不精密度計算公式：
C.6.2.3 不精密度結果表達
采用表C.3格式表達不精密度的試驗結果。
C.6.3 臨床性能研究
C.6.3.1 參考范圍
C.6.3.1.1 根據所有原始數據，建立每種類型細胞的直方圖。觀察直方圖的界外值（界外值為超出均值3s的值）。
C.6.3.1.2 核查界外值，排除謄寫錯誤。如果仍有界外值，剔除該樣本的全部數據。
C.6.3.1.3 從原始數據剔除界外值后，在余值直方圖上導出參考范圍。參考范圍定義為95%健康人群的結果。按照每種方法每種細胞類型列出參考范圍。
C.6.3.2 臨床性能研究
C.6.3.2.1 比較每種細胞類型的儀器法均值和參考方法均值。
C.6.3.2.2 根據儀器法和參考方法數據，將實驗結果分成正常或異常兩類。異常病例按下列要求分成亞類：（1）分布異常：即中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞計數值超出參考范圍；（2）形態異常：即中性桿狀核粒細胞增加、異型淋巴細胞增加、出現幼稚細胞、出現有核紅細胞和其他異常細胞，可伴有或不伴有細胞的數量異常。
同一患者可能同時存在分布異常和形態異常。儀器法不能分類的結果，不是分布異常，就是形態異常。
C.6.3.2.3 制定所有結果不一致樣本的清單，進行仲裁。
C.6.3.3 仲裁
C.6.3.3.1 原則
仲裁是對儀器法和參考方法有分布或形態結果差異的樣本而言。仲裁者為具備資格的檢驗人員，通常具有專門技術和經驗，并且在性能評價研究中，尚未參與任何參考分類計數工作。
C.6.3.3.2 仲裁方法
C.6.3.3.2.1 對所有參考方法和儀器法不同的結果，核查制片是否良好，染色是否可接受，有無謄寫錯誤。
C.6.3.3.2.2 對于形態不一致：
（1）判斷2張參考血涂片為何種異常，核查儀器法結果，確認有無形態報警。
（2）如果有一位檢驗人員發現異常，瀏覽2張血涂片，確認有無形態異常。
（3）如果儀器法有形態異常報警，但是檢驗人員未發現形態異常，應仔細瀏覽2張血涂片，確認
2位檢驗人員有無漏報。
C.6.3.3.2.3 對于分布不一致：
（1）用參考方法對每份樣本進行重新分析（若有可能，用儀器法進行重新分析），觀察是否每次
分析雙份結果差異大于方法預期的不精密度。
（2）如果參考方法結果的差異超出預期范圍，再進行200個細胞分類計數，并與原始結果進行比
較。如果仲裁者計數結果與2份原始結果之一符合，即在可信區間內，但和另一位檢驗人員結果不一致，則采用仲裁者計數結果，重新評價臨床性能。若仲裁者計數在原始2份計數結果的中間，則用原始計數結果。
（3）如果儀器法雙份測定結果之間的差異超出了預期范圍，核查該結果，確認有無因樣本異常所
致的儀器故障，使分類計數結果無效。若儀器法為形態異常，應從分布分類表中剔除該數據。
C.6.3.3.3 修正
用仲裁結論修正分布和形態分類表。
C.6.3.3.4 不一致性
作為分類表的補充，準備不一致結果的清單，包括樣本數和不一致原因（如“第63號樣本參考方法發現原始細胞，儀器法漏報”。）
C.6.3.4 判斷臨床準確性
根據分布和形態分類表，計算儀器法和參考方法之間的一致率，假陽性率和假陰性率。
分布和形態分類表
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參考文獻
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