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是采用色譜技術(shù)(TLC、GC和HPLC)分離測(cè)定光學(xué)異構(gòu)體藥物的有效方法。由于許多藥物的對(duì)映體(Enantiomer)之間在藥理、毒理乃至臨床性質(zhì)方面存在著較大差異，有必要對(duì)某些手性藥物進(jìn)行對(duì)映體的純度檢查。
（一）原理和方法：對(duì)映體化合物之間除了對(duì)偏振光的偏轉(zhuǎn)方向恰好相反外，其理化性質(zhì)是*相同的，因而難以分離。傳統(tǒng)方法（分步結(jié)晶法、酶消化法等）有很大局限性，特別是難以進(jìn)行微量分離和測(cè)定。60年代前后，TLC、GC法逐漸用于對(duì)映體化合物的拆分。但這兩種方法只能拆分不多的化合物，且需要較復(fù)雜的樣品處理步驟，制備分離也難以進(jìn)行。80年代初HPLC法迅速成為藥物對(duì)映體分離和測(cè)定為廣泛應(yīng)用的方法。
HPLC用于手性分離概括起來(lái)可分為兩大途徑：間接(CDR)和直接(CMPA、CSP)方法。
間接方法主要基于外消旋體混合物經(jīng)柱前衍生化形成一對(duì)非對(duì)映異構(gòu)體(Diastereoisomers)。此法又稱(chēng)為非對(duì)映體拆分法或柱前手性衍生化法。由于d-型和l-型對(duì)映體的物理性質(zhì)*相同，只能在手性固定相上才能獲得拆分；如果利用對(duì)映體分子中的反應(yīng)基團(tuán)與某一光學(xué)純?cè)噭┓磻?yīng)形成了非對(duì)映光學(xué)異構(gòu)體混合物，其物理性質(zhì)就有較大的差異，因而可在普通固定相（非手性固定相）上實(shí)現(xiàn)分離。本法需高光學(xué)純度的手性衍生化試劑(Chiral Derivatization Reagent,CDR)，衍生化反應(yīng)往往比較繁瑣費(fèi)時(shí)；各對(duì)映體衍生化反應(yīng)的速率有時(shí)也不相同。由于可采用價(jià)格便宜、柱效較高的非手性柱和通過(guò)適當(dāng)?shù)难苌磻?yīng)可提高檢測(cè)的靈敏度，以及衍生化過(guò)程中可伴隨樣品的純化等優(yōu)點(diǎn)，柱前手性衍生化的方法仍然是當(dāng)前手性藥物拆分、尤其是生物樣品中藥物對(duì)映體分離和測(cè)定的常用方法。
直接方法主要采用手性流動(dòng)相添加劑(Chiral Phase Additives,CMPA)法和手性固定相(CSP)法。CMPA法又可稱(chēng)為手性流動(dòng)相(CMP)拆分法或手性洗脫法。它不必事先將樣品制備成衍生物，而只須將手性劑加入流動(dòng)相中。手性添加劑與樣品所形成的各種手性絡(luò)合物雖然不及CDR法所形成的衍生物那樣牢固，但它所依據(jù)的手性識(shí)別作用和絡(luò)合物的非對(duì)映異構(gòu)體性質(zhì)卻基本相同。常用的CMPA有：環(huán)糊精(Cyclodextrins)類(lèi)（主要是α-、β-和γ-環(huán)糊精及其衍生物）；手性離子對(duì)配合劑(Chiral Ion Pair Complex,CIPC)，如（+）-10-樟腦磺酸、奎寧和奎尼丁等；以及配位體交換型手性流動(dòng)相添加劑(Chiral Ligand-exchange Complexes,CLEC)，其中手性配位體多為光活性氨基酸或其衍生物，再與二價(jià)金屬離子形成螯合的配位化合物，以適當(dāng)?shù)臐舛确植加诹鲃?dòng)相中，遇有藥物消旋體時(shí)即可形成相應(yīng)的非對(duì)映體配位化合物對(duì)，然后在正相柱或反相柱上完成拆分。近年來(lái)CSP法發(fā)展迅猛，應(yīng)用日益廣泛。它是不經(jīng)轉(zhuǎn)變成非對(duì)映體而直接拆分的方法，優(yōu)點(diǎn)是：適用于不含活潑反應(yīng)基團(tuán)的化合物；除非必須衍生化，否則無(wú)需高光學(xué)純度試劑；樣品處理步驟簡(jiǎn)單。但迄今為止，CSP柱商品已有40多種，價(jià)格大多昂貴，尚未有一種具有類(lèi)似ODS柱的普遍適用性。根據(jù)分子結(jié)構(gòu)選擇合適的CSP柱是非常重要的。常用的CSP有：手性電荷遷移配位體固定相，如 Pirkle型HPLC-CSP；蛋白親和配體固定相，如 Enantiopac(LKB)；內(nèi)部配位化合固定相，如環(huán)糊精(Cydobond)和纖維素酯(Chiracel)等；以及配基交換固定相，如L-脯氨酸-Cu2+共價(jià)鍵合于聚苯乙烯等基質(zhì)上。
CSP拆分對(duì)映體的理論概念：在HPLC的CSP柱上拆分對(duì)映體是利用藥物對(duì)映體和特制的、在硅膠上鍵合的對(duì)映體固定相（CSP）之間所形成的非對(duì)映體復(fù)合物。由于非對(duì)映體復(fù)合物穩(wěn)定性差異，可使兩個(gè)對(duì)映體的保留時(shí)間不一致，與CSP形成穩(wěn)定性較差的非對(duì)映體的藥物對(duì)映體可先洗脫，因之實(shí)現(xiàn)了拆分。CSP設(shè)計(jì)是基于Dalgliesh在1952年提出的“三點(diǎn)手性識(shí)別模式”(Three-point chiral recognition model)，認(rèn)為要實(shí)現(xiàn)手性識(shí)別，在手性化合物分子與CSP之間至少同時(shí)要有三個(gè)相互作用部位，其中之一必受空間影響，或是相互吸引或是相互排斥。生成的非對(duì)映體的相對(duì)強(qiáng)度，決定了兩個(gè)對(duì)映體的分離度和洗脫次序。
（二）三類(lèi)手性分離方法的比較：CDR法的優(yōu)點(diǎn)是應(yīng)用條件相對(duì)簡(jiǎn)易，只需采用普通HPLC的固定相和流動(dòng)相即可而且通過(guò)衍生化有利于增加檢測(cè)（紫外或熒光）靈敏度；缺點(diǎn)是樣品中相關(guān)化合物須預(yù)先分離、衍生化手性試劑的光學(xué)純度的高要求以及異體對(duì)的衍生化反應(yīng)速率不一。
CMPA法的優(yōu)點(diǎn)是不必作柱前手性衍生化；對(duì)固定相也無(wú)特殊要求；樣品的非對(duì)映異構(gòu)化絡(luò)合具有可逆性而且利于制備。主要缺點(diǎn)是可拆分的化合物范圍有限；某些添加劑不夠穩(wěn)定而且往往會(huì)干擾檢測(cè)。
CSP法的優(yōu)點(diǎn)較多，能廣泛適用于各類(lèi)化合物，適于常規(guī)及生物樣品的分析測(cè)定，制備分離方便，定量分析的可靠性較高，采用此法研究考察的化合物已達(dá)數(shù)千種之多。缺點(diǎn)是樣品有時(shí)也須作柱前衍生（但不一定是手性衍生化試劑），對(duì)樣品結(jié)構(gòu)有一定限制，其適用性尚不及普通HPLC固定相（包括正相和反相）那樣廣泛。
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